結果描述

可能的原因

建議及預防措施

終止後,整闆結果顯現均一(yī)的黃色或淡色;或标曲有線性但背景過高

整版發黃現象可能由于錯加其他試劑造成

實驗前檢查試劑的組分(fēn)及批号,确認所有組分(fēn)均屬于對應的試劑盒.不同試劑盒或不同批号

未充分(fēn)清洗酶标闆

确保清洗過程中(zhōng)每個微孔所加入洗滌液量一(yī)緻.清洗完成後,将酶标闆用力按壓在吸水紙(zhǐ)上,以除去(qù)殘餘的緩沖液.

孵育時間過長

請嚴格按照說明書(shū)步驟操作

酶标記物(wù)污染了吸頭及盛放(fàng)顯色劑容器或陽性對照污染了微孔

吸取不同的試劑時應更換吸頭,配置不同的試劑組分(fēn)時,應使用不同的儲存器皿,操作時請使用移液器

檢測抗體(tǐ)貨Avidin-HRP的濃度過高

檢查濃度計算是否正确或進一(yī)步稀釋後再使用

底物(wù)在使用前曝光或污染

加入底物(wù)前,應始終避光保存

顯色時間過長

請嚴格按照說明書(shū)步驟操作

讀取了吸光值時使用了錯誤的濾光片

TMB爲底物(wù)時應在450nm波長讀取吸光值,并以650nm作爲校正波長

結果描述

可能的原因

建議及預防措施

顯色步驟結束後,酶标闆所有孔均無顔色;陽性對照不明顯

組分(fēn)試劑混淆使用

配制或使用時應看清楚标簽

洗版及加樣過程中(zhōng),酶标物(wù)受污染失活失去(qù)催化顯色劑顯色的能力

确認盛酶标的容器不含酶抑制劑(如NaN3等),确認配制洗液的容器已洗幹淨.

遺漏了某種試劑或某個步驟

詳細審閱說明書(shū),并嚴格遵循操作步驟

結果描述

可能的原因

建議及預防措施

包括标曲、樣本在内的所有闆孔顔色均較淡

試劑盒超過有效期或儲存不當

請在有效期内使用,并按照說明書(shū)推薦的保存條件保存,避免污染

試劑、樣品用前未平衡

所有試劑、樣品應置室溫平衡30min左右

移液器吸量不足,移液抽吸排放(fàng)太快,吸頭内壁挂液太多或内壁不清潔

校正移液器,吸頭要配套,每次吸頭要吻合緊密,移液不宜過快,排放(fàng)應完全.吸頭内壁要清潔,最好一(yī)次性使用.

孵育反應時間不足

定時器準确定時

顯色反應不足

一(yī)般在15-30min

洗滌次數增加,濃縮洗液稀釋倍數不符合要求

減少洗滌沖擊力,按照說明書(shū)要求稀釋濃縮洗液、洗滌時間,準确記錄洗滌次數及用量

蒸餾水水質有問題

配置好的洗液一(yī)定要檢測PH值是否呈中(zhōng)性

洗闆及加樣過程中(zhōng),酶标物(wù)受污染失活而失去(qù)催化顯色劑顯色的能力

确認盛酶标的容器不含酶抑制劑(如NaN3等),确認配制洗液的容器已經洗幹淨,确認配置洗液的純化水達到要求且未受污染.

标曲正常,樣本顯色較淡

樣本使用NaN3防腐劑,抑制了酶的反應

樣本不可使用NaN3

待測樣本中(zhōng)可能不含強陽性标本,故結果可能是正常的

如有懷疑,可以複檢

目測結果正常,但酶标儀讀值偏低

讀取吸光值時使用了錯誤的濾光片

TMB爲底物(wù)時應在450nm波長讀取吸光值,并以650nm作爲校正波長

結果描述

可能的原因

建議及預防措施

重複性差

标準品配制有誤

嚴格按照說明書(shū)标準品配制進行操作,僅使用推薦的稀釋液對标準品進行稀釋

試劑盒儲存方法不當或儲存環境太差

請在說明書(shū)推薦的條件下(xià)保存,不要将重懸後的組分(fēn)在室溫放(fàng)置時間過長

過早稀釋各工(gōng)作組分(fēn)

各工(gōng)作組分(fēn)請在使用前10分(fēn)鍾配置,并立即加入到微孔中(zhōng)

樣本加入後未混勻

針對同時加入多種試劑組分(fēn),加樣後在混勻器上充分(fēn)混勻,注意穩拿穩放(fàng),防止外(wài)濺

酶标儀測定重複性差

校準酶标儀

孵育時間、洗滌條件、顯色條件、操作人員(yuán)不一(yī)緻

重複測定标本,反應條件、人員(yuán)等盡可能與上次保持一(yī)緻

洗滌不正确

移液器準确加入200µl/孔洗滌液或注滿各孔,但不要溢出.洗闆機洗闆時不應有堵孔,洗滌應充分(fēn)

孵育溫度恒溫效果不好

保持溫度恒定,避免局部溫度過高過低

加液時,過多殘留于孔壁上

加液時,吸頭在不碰到孔底的前提下(xià)盡量沿着孔壁下(xià)方加液

耗材重複使用

吸取不同的試劑時應更換吸頭,配置不同的試劑組分(fēn)時,應使用不同的儲液器皿

微孔底部被劃傷或者存在污垢

操作時細心,注意不要觸碰底部擦拭酶标闆底部,以去(qù)除污垢或者指紋

阈值附近時陰時陽

同一(yī)樣品做3個複孔,以2個(含2個以上相同結果爲準)

加樣時交叉污染

加标本時盡量避免交叉污染

出現随機性的花闆、跳孔現象

手工(gōng)洗闆造成的交叉污染

手工(gōng)洗闆時前3次注洗液後應立即棄去(qù),後幾次再設定浸泡時間,可以減少交叉污染

拍闆時交叉污染

拍闆時用合适的吸水紙(zhǐ)巾,不要把無關物(wù)質拍進闆孔,并盡量不要在同一(yī)位置拍,以免交叉污染

洗闆機加液頭堵塞導緻加液不滿或吸液殘留量較大(dà),造成花闆、跳孔

疏通加液頭,使洗闆時每孔均注滿洗液,吸液時殘留量要小(xiǎo)

樣本離(lí)心處理不全,緻使反應孔内發生(shēng)凝血現象或存在沉澱物(wù)或殘留細胞成分(fēn)幹擾

血清血漿應充分(fēn)離(lí)心,3000rpm 6min以上

樣品放(fàng)置時間過長,污染

樣品應保持新鮮,或低溫保存,防止污染

洗滌液配制有誤或直接誤用濃縮洗滌液

請按說明書(shū)配置