品系背景∶C57BL/6N

品系構建策略∶

在小(xiǎo)鼠PD-1基因位點敲入人源PD-1胞外(wài)域序列，保留小(xiǎo)鼠跨膜域和胞内域，構建嵌合型PD-1人源化小(xiǎo)鼠模型。

品系說明∶

hPD-1在小(xiǎo)鼠體(tǐ)内具有正常的生(shēng)理表達和調節模式。

PD-1胞外(wài)域人源化，利于hPD-1靶向藥物(wù)的識别。

保留小(xiǎo)鼠PD-1胞内域，保證正常的胞内信号轉導。

小(xiǎo)鼠靶基因不表達，避免交叉反應。

小(xiǎo)鼠的免疫系統功能健全。

研究應用∶

本模型可用于評估hPD-1靶向藥物(wù)在免疫健全小(xiǎo)鼠體(tǐ)内的有效性及安全性∶

與人源化腫瘤細胞系聯用

例如∶與MC38-hPD-L1腫瘤細胞系聯用，構建同源腫瘤模型，以測試靶向hPD-1和hPD-L1 的聯合療法的療效。

與其他免疫檢查點人源化小(xiǎo)鼠雜(zá)交

例如∶與hVISTA小(xiǎo)鼠雜(zá)交，在得到的雙人源化的hPD-1/hVISTA小(xiǎo)鼠模型中(zhōng)評估靶向hPD-1 和/或hVISTA的兩種藥物(wù)。

模型驗證∶

PD-1表達檢測

圖1.hPD-1在hPD-1小(xiǎo)鼠中(zhōng)的表達模式與mPD-1在野生(shēng)型小(xiǎo)鼠中(zhōng)的表達模式一(yī)緻。

hPD-1和mPD-1在經αCD3/αCD28抗體(tǐ)活化的hPD-1小(xiǎo)鼠和野生(shēng)型小(xiǎo)鼠脾細胞中(zhōng)的表達情況∶（A）Treg亞群、CD4+亞群（CD3+CD4+Foxp3-）和（B）CD8+T（CD3+CD8+）亞群。

圖2. hPD-1在hPD-1小(xiǎo)鼠的腫瘤浸潤淋巴細胞中(zhōng)的表達。

從接種了MC38腫瘤細胞30天的野生(shēng)型小(xiǎo)鼠和hPD-1小(xiǎo)鼠中(zhōng)分(fēn)離(lí)腫瘤浸潤淋巴細胞（TILs）。hPD-1小(xiǎo)鼠在CD4+ T細胞和CD8+ T細胞上表達hPD-1蛋白(bái)，野生(shēng)型小(xiǎo)鼠在CD4* T細胞和CD8+ T細胞上表達mPD-1蛋白(bái)。

PD-1功能檢測

圖3.T細胞活化（IL-2的産生(shēng)和擴增）在野生(shēng)型小(xiǎo)鼠和PD-1人源化小(xiǎo)鼠之間沒有差别。

A.采用ELISA法測定野生(shēng)型小(xiǎo)鼠和PD-1人源化小(xiǎo)鼠αCD3/αCD28活化脾細胞的上清液中(zhōng)IL-2 的産生(shēng)情況，兩者沒有差别。

B.αCD3激活的脾細胞和淋巴結（LN）中(zhōng)的 CD4+T細胞亞群（CD4+ CD25-），CFSE标記顯示在兩種小(xiǎo)鼠之間的活化CD4+T細胞亞群的數量沒有明顯差别。

體(tǐ)内藥效實驗

圖4.人源化PD-1小(xiǎo)鼠體(tǐ)内觀察到hPD-1單抗的抗腫瘤活性。

A）hPD-1小(xiǎo)鼠接種MC38小(xiǎo)鼠結直腸癌細胞28天後，分(fēn)别用A、B、C三種αhPD-1單抗以及同型對照處理後的腫瘤體(tǐ)積。

B)  野生(shēng)型和hPD-1小(xiǎo)鼠顱内接種GL261小(xiǎo)鼠膠質瘤細胞後，用αhPD-1抗體(tǐ)或amPD-1抗體(tǐ)處理。αhPD-1抗體(tǐ)處理能夠顯著提高hPD-1小(xiǎo)鼠的生(shēng)存率。