貼壁細胞總蛋白(bái)提取：

用TBS緩沖液潤洗貼壁細胞2-3次，最後一(yī)次盡量吸幹殘留液。加入适當體(tǐ)積的細胞總蛋白(bái)提取試劑(使用前數分(fēn)鍾内加入蛋白(bái)酶抑制劑)于培養闆/瓶内裂解3-5min。期間反複晃動培養闆/瓶，使試劑與細胞充分(fēn)接觸。用細胞刮刀将細胞及試劑刮下(xià)，收集到1.5mL離(lí)心管中(zhōng)。冰浴30min，期間用移液器反複吹打，确保細胞完全裂解。4℃13000g離(lí)心5min，收集上清，即爲總蛋白(bái)溶液。

懸浮細胞總蛋白(bái)提取：

低速離(lí)心收集細胞，加入适當體(tǐ)積的冷卻的PBS緩沖液重懸，2000rpm離(lí)心10min，吸除上清。重複以上操作兩次，收集細胞沉澱。加入适當體(tǐ)積的細胞總蛋白(bái)提取試劑(使用前數分(fēn)鍾内加入蛋白(bái)酶抑制劑)，振蕩。冰浴30min，期間用移液器反複吹打，确保細胞完全裂解。4℃13000g離(lí)心5min，收集上清，即爲總蛋白(bái)溶液。

組織總蛋白(bái)提取：

組織塊用預冷的PBS緩沖液漂洗2-3次，去(qù)除血污，剪成小(xiǎo)塊置于勻漿器中(zhōng)。加入10倍于組織體(tǐ)積的組織蛋白(bái)提取試劑(使用前數分(fēn)鍾内加入蛋白(bái)酶抑制劑)，冰浴徹底勻漿。将勻漿液轉移至離(lí)心管中(zhōng)，振蕩。冰浴30min，期間用移液器反複吹打，确保勻漿液完全裂解。4℃13000g離(lí)心5min，收集上清，即爲總蛋白(bái)溶液。

胞漿胞核蛋白(bái)提取：

收集細胞，将細胞重懸于适當體(tǐ)積的漿蛋白(bái)提取試劑(使用前數分(fēn)鍾内加入蛋白(bái)酶抑制劑)中(zhōng)，振蕩混勻15 秒，使細胞完全懸浮并分(fēn)散開(kāi)。如果細胞沉澱沒有完全懸浮并分(fēn)散開(kāi)，可以适當延長振蕩混勻時間。冰浴30 min。高速振蕩混勻5 秒，4℃13000g 離(lí)心10 min。吸取上清至一(yī)預冷的離(lí)心管中(zhōng)，即爲細胞漿蛋白(bái)。吸盡上清(上清盡量去(qù)淨，避免漿蛋白(bái)污染)，加入适當體(tǐ)積的核蛋白(bái)提取試劑(使用前數分(fēn)鍾内加入蛋白(bái)酶抑制劑)，高速振蕩混勻15 秒，使沉澱完全懸浮并分(fēn)散開(kāi)。冰浴30min，每隔5min劇烈振蕩混勻10～20s， 4℃13000g離(lí)心10 min。吸取上清至一(yī)預冷的離(lí)心管中(zhōng)，即爲細胞核蛋白(bái)。