方法一(yī)：使用Curve  Expert1.4軟件（點擊下(xià)載Curve  Expert1.4）

标準曲線的繪制 

可以采用各種繪圖軟件來繪制ELISA标準曲線，下(xià)面以“Curve  Expert1.4”軟件爲例，繪制ELISA标準曲線的方法如下(xià)；

1．啓動“Curve  Expert”

2．X軸輸入标準品的OD值（雙抗夾心輸入OD-空白(bái)值），Y軸輸入所對應的濃度值，如圖：

3．單擊[運行]  按鈕，出現如下(xià)對話(huà)框

4．單擊[ok]按鈕，出現如下(xià)兩個對話(huà)框，關閉下(xià)面一(yī)個對話(huà)框

5. 在對話(huà)框的右上角出現一(yī)些曲線的名稱，從“1”開(kāi)始依次點擊曲線名稱，在右下(xià)角會出現相應拟合的曲線。

（一(yī)般選擇第一(yī)個多項式拟合）

6. 根據拟合的曲線選取ELISA拟合度最佳的曲線雙擊，出現如下(xià)對話(huà)框：

注意：選擇系數（即“r”值）最好的曲線方程來進行運算。在下(xià)面的對話(huà)框

右上角有“r”值 ，當“r”值越接近1拟合度越好

7．按[Ctrl]鍵+[L]鍵，出現如下(xià)對話(huà)框：

8．輸入标準的OD值，單擊[Calculate]按忸，即可得到待測蛋白(bái)的實際含量（标本稀釋了N倍，運算出的數值應在乘以N）。

9. 如想得到ELISA拟合曲線的方程，可在步驟6的對話(huà)框空白(bái)處右擊，選擇”Information”

10. 得到如下(xià)對話(huà)框：點擊“Copy”

在你需要的位置粘貼即可得到如下(xià)數據：

Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2)

Coefficient Data:

a =   -21.531017

b =  212.05019

c =  -0.24054479

d =  0.018060778

11. 修改作圖中(zhōng)X,Y坐标軸高度以及相關屬性

選擇步驟9所示圖中(zhōng)的第二排“Graph Properties”，修改好後點擊OK保存

方法二: 使用OriginPro 2021軟件計算競争法試劑盒ELISA結果

第一(yī)步：我(wǒ)們以PG(Progesterone) ELISA Kit 這個試劑盒爲例

将标曲的數據複制粘貼在如下(xià)表框中(zhōng)

按下(xià)Ctrl+A鍵全選然後鼠标依次單擊，Analysis---Fitting---Nonlinear Curve Fit---Open Dialog...

在Function Selection選項卡中(zhōng)，将 Category 參數設置爲 Statistics

将Function參數設置爲 Logistic

在Find X/Y選項卡中(zhōng)對 Find X from Y 進行勾選，然後單擊 Fit 鍵

橫縱坐标選擇Log10參數，注意from / to 的上下(xià)限值的選擇，完成後單擊OK 鍵

最後結果計算，競争法由于OD值與樣品濃度成反比關系，所以不需要減去(qù)零孔背景值，如果是夾心法的試劑盒，則還需要事先在excel中(zhōng)減去(qù)背景值然後再依據教程進行計算。