組織勻漿定義：将分(fēn)化的細胞群用物(wù)理機械手段或其它方法，使細胞破碎，細胞内容物(wù)釋放(fàng)，與細胞碎片形成的固液混合形式的濃稠液體(tǐ)。

一(yī)、取适量組織塊，用預冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.4）沖洗，去(qù)除表面殘留的血液與雜(zá)質。（很多用戶疑惑，這個适量，到底是多少？ELISA試劑盒檢測中(zhōng)：血清或細胞上清樣本用量100μL/指标（單孔）；組織用量15mg/指标（單孔），差不多幹枯綠豆大(dà)小(xiǎo)。 ）具體(tǐ)老鼠各器官大(dà)小(xiǎo)可見下(xià)圖。

二、将組織塊稱重，再剪切成盡可能的小(xiǎo)碎塊，以便充分(fēn)勻漿；

三、可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果：首先将組織塊移入玻璃勻漿器，加入 5-10ml預冷PBS(組織與 PBS 的質量體(tǐ)積比建議爲 1:9，即1g 樣本加入 9ml PBS)進行充分(fēn)研磨（有條件實驗室可選用機器勻漿），該過程需在冰上進行；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反複凍融進一(yī)步處理（超聲破碎過程中(zhōng)注意冰浴降溫；反複凍融法可重複 2 次）。

玻璃勻漿器

超聲波細胞破碎儀

超聲波細胞破碎儀能用于多種動植物(wù)、病毒、細胞、細菌及組織的破碎，同時可用來乳化、分(fēn)立、勻化、提取、消泡、清晰、納米材料的植被、分(fēn)散及加速化學反應等，在醫學、軍事、工(gōng)業、農業上有很多的應用。

1、在破碎的過程中(zhōng)會大(dà)量的産熱，一(yī)般的都是冰浴下(xià)破碎；

2、切記空載，一(yī)定要将超聲變幅杆插入樣品後才能開(kāi)機；

3、變幅杆（超聲探頭）入水深度：15mm左右，液面高度最好有25mm以上，探頭要居中(zhōng)，探頭不能碰到容器壁和底。超聲波是垂直縱波，插入太深不容易形成對流，影響破碎效率；

1）時間：超聲時間每次最好不要超過5秒，間隙時間應大(dà)于或等于超聲時間，以便于熱量散發。時間設定應以超聲時間短，超聲次數多原則，可延長超聲機子以及探頭的壽命；

2）超聲功率：不宜太大(dà)，以免樣品飛濺或起泡沫。如小(xiǎo)于10ml樣品容量，功率應在200w以内；10-200ml樣品容量的功率在200－400w；200ml以上的樣品容量功率在300-600w之間；

3）容器選擇：有多少的樣品就選多大(dà)的燒杯，這樣也是有利樣品在超聲中(zhōng)對流，提高破碎效率。例如；20ML的處理量最好用25ML的燒杯；

如10ml細胞勻漿樣品設置參數:100W，60次，超聲3秒，間隙5秒 (總時間爲8分(fēn)鍾)。

5、若樣品放(fàng)在1.5ml的EP管裏請一(yī)定要将EP管固定好，以防冰浴融化後液面下(xià)降導緻空載；

6、日常保養：用完後用酒精擦洗探頭或用清水進行超聲；

7、使用超聲波細胞破碎儀微探頭時，振幅調節不得超過70%，否則會造成探頭損壞。

四、将制備好的勻漿液于5000×g 離(lí)心 5分(fēn)鍾，留取上清即可檢測。

五、如果樣本需要長期保存，請添加蛋白(bái)酶抑制劑。根據實驗需要，組織勻漿樣本可先定量總蛋白(bái)，以便于統計分(fēn)析數據。某些組織樣本腎髒，腦組織會有假陽性反應。處理樣本的過程就是收集目标蛋白(bái)的過程，由于蛋白(bái)容易變性，降解，故該過程應盡量溫和。樣本處理之後的儲存也非常重要，尤其注意不要反複凍融，樣本處理之後可分(fēn)裝密封保存， 4℃保存應小(xiǎo)于 1 周，-20 ℃不應超過 1 個月，-80℃不應超過3個月。在标本使用前應緩慢(màn)均衡至室溫，不應加熱使之融解。