内參即是内部參照（Internal control），是指在組織和細胞中(zhōng)表達相對穩定的一(yī)類蛋白(bái)質，通常由管家基因編碼。這些蛋白(bái)質被用作檢測蛋白(bái)表達水平變化時的參照物(wù)，以确定實驗的準确性和可重複性。

在Western Blot實驗中(zhōng)，我(wǒ)們使用内參其實就是使用與内參對應的抗體(tǐ)來檢測内參的表達量。由于内參在不同組織和細胞中(zhōng)的表達量相對穩定，通過檢測每個樣品内參的表達量，我(wǒ)們可以校正上樣誤差，從而獲得更可靠的半定量結果。使用内參還可以作爲空白(bái)對照，檢測蛋白(bái)轉膜情況是否完全，并檢查該實驗中(zhōng)的顯色或發光體(tǐ)系是否正常。通過選擇合适的内參，可以将這些樣本之間的差異消除或最小(xiǎo)化，減少實驗誤差，提高結果的可靠性和可重複性。因此，選擇合适的内參是Western Blot實驗的關鍵步驟之一(yī)。

根據所做的蛋白(bái)樣本的種屬确定，哺乳動物(wù)一(yī)般β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Na+/K+-ATPase等；植物(wù)樣本一(yī)般選擇Plant actin、Rubisco等；其他來源樣本應參考文獻報道選合适蛋白(bái)作爲内參。

根據研究對象的不同，選擇不同的内參對于檢測細胞中(zhōng)不同位置的蛋白(bái)非常重要。一(yī)般情況下(xià)，選擇β-actin和GAPDH作爲總蛋白(bái)的内參就可以滿足要求。然而，對于細胞質、細胞核、細胞膜等不同位置的蛋白(bái)檢測，我(wǒ)們需要選擇相應的内參，以确保實驗結果具有科學性和可靠性。常用内參抗體(tǐ)分(fēn)子量及其定位情況如下(xià)：

在選擇内參抗體(tǐ)時應考慮目的蛋白(bái)分(fēn)子量大(dà)小(xiǎo)，通常要求目的蛋白(bái)與内參蛋白(bái)分(fēn)子量相差5kDa以上。例如，若檢測的目的蛋白(bái)分(fēn)子量爲45kDa，則不宜選擇分(fēn)子量爲42kDa的β-actin作爲内參，應考慮選擇分(fēn)子量爲36kDa的GAPDH作爲内參。

在實際的實驗環境中(zhōng)，處理條件可能會影響一(yī)些内參的表達，因此需要考慮研究的信号通路是否會對内參的表達産生(shēng)影響。例如，在糖代謝的研究中(zhōng)，不能使用GAPDH作爲内參，因爲GAPDH是參與糖酵解過程中(zhōng)的酶，在某些細胞中(zhōng)，缺氧等條件會改變GAPDH的表達；在凋亡實驗時，Lamin等也不适合作爲内參；在加入抗有絲分(fēn)裂和抗真菌藥物(wù)時，Tubulin的表達易受影響，不适合作爲内參等。因此，在設計實驗方案的時候應考慮這些因素并參考相關文獻，在實驗過程中(zhōng)，還需要留意内參表達是否出現異常等因素的考慮。