1、樣本RNA得率以及各類項目最低起始量

 

各樣本Total RNA得率統計（僅供參考）：

測序項目推薦起始量（起始量僅供參考，外(wài)泌體(tǐ)不允許18s/28s rRNA有峰）：

表達譜芯片及小(xiǎo)RNA測序體(tǐ)液樣本及外(wài)泌體(tǐ)項目起始量（僅供參考）

 

2、各類樣本準備指南(nán)

2.1 動物(wù)組織/臨床組織采集

① 取新鮮組織，組織體(tǐ)積要小(xiǎo)，盡量長寬高≤0.5cm，考慮到可操作性，所切組織塊的大(dà)小(xiǎo)可參考綠豆顆粒的大(dà)小(xiǎo)

② 去(qù)除非研究的組織類型（如結締組織，脂肪組織等），如果是臨床病變組織的取材要正确判斷病變以及正常組織，應将病變組織周圍的正常組織去(qù)掉，反之亦然。

③ 迅速用2-6℃預冷RNase-Free水配制的1×PBS或生(shēng)理鹽水清洗組織表面的血迹和污漬，使用無塵紙(zhǐ)巾吸幹表面的液體(tǐ)

④ 處理好的組織迅速放(fàng)入預冷好的已寫好編号的RNase-Free的帶螺紋口的耐-192℃超低溫凍存管中(zhōng)，迅速置于 液氮速凍1小(xiǎo)時後轉存于-80℃長期保存，在RNA提取前避免反複凍融。

注意事項：

a. 如果實驗室沒有條件，如缺乏液氮、幹冰以及-80℃冰箱等條件下(xià)，需要RNAlater及類似組織保存液保存的樣本，嚴格按照操作說明進行，迅速的将樣本分(fēn)割成長寬高≤0.5cm，約豌豆大(dà)小(xiǎo)的小(xiǎo)塊（一(yī)般重約100mg，不過無需精準測量，一(yī)般需要10個小(xiǎo)塊左右），由于組織塊過大(dà)會影響RNAlater滲透入組織内部的效率，組織塊過大(dà)也會造成RNAlater無法完全覆蓋組織，而未被RNAlater覆蓋的組織部位極易被核酸酶降解。然後投入提前準備好的裝滿RNAlater的1.5mL的EP管中(zhōng)，使樣本完全浸沒在液體(tǐ)中(zhōng)，然後置于4℃中(zhōng)保存過夜，幹冰運輸，或-80℃保存。

b. 不允許寄送用裂解液保存的組織樣本，因爲實驗中(zhōng)發現用Trizol保存的組織樣本，無論是研磨好的粉末還是切割好的組織塊，所抽提的RNA質量普遍很差；

c. 動物(wù)及臨床組織不要使用錫箔紙(zhǐ)包裹，錫箔紙(zhǐ)容易與動物(wù)及臨床組織粘一(yī)起，RNA抽提的過程錫箔紙(zhǐ)容易帶入，引起污染。

2.2 細胞樣品的采集

貼壁細胞的處理：

① 從培養箱取出貼壁生(shēng)長細胞，顯微鏡下(xià)觀察細胞确定生(shēng)長狀态良好棄培養基

② 小(xiǎo)心加入與培養基等體(tǐ)積的無酶水配制的1×PBS後，平放(fàng)1min洗滌細胞，然後棄去(qù)PBS，重複一(yī)次

③ 加入适量裂解液反複吹打至充分(fēn)裂解（以TriZol爲例，10-15cm的大(dà)皿，每次先添加1-2mL，吹打混勻，裂解充分(fēn)的标準爲吹打時液體(tǐ)不粘稠，流動性好。如果液體(tǐ)過于粘稠說明還未裂解充分(fēn)，需添加裂解液，每次添加的量建議爲100μL左右持續添加，直到液體(tǐ)不粘稠爲止）

④轉移至 耐-192℃低溫的螺紋口凍存管後，-80℃冰箱長期保存，幹冰運輸

懸浮細胞的處理：

①選取生(shēng)長狀态良好的細胞懸液

②200-1000g離(lí)心5-10min，得到細胞沉澱棄培養基

③加入适量 RNase-Free水配制的1×PBS後，寬口槍頭輕柔吹打重懸細胞沉澱，然後用200g離(lí)心5min，棄PBS， 重複一(yī)次

④加入适量TriZol裂解液反複吹打至充分(fēn)裂解（裂解标準同上面的貼壁細胞處理方式類似）

④轉移至 耐-192℃低溫的螺紋口凍存管後，-80℃長期保存，幹冰運輸

注意事項：

a. 勿将幹凍的細胞直接寄送，因爲細胞冷凍的過程中(zhōng)冰晶很容易刺破細胞，此時破碎的細胞會容易對RNA和RNA降解

b. 細胞樣品勿用胰酶消化，胰酶會消化細胞膜上的膜蛋白(bái)，導緻細胞破裂，破裂的細胞會釋放(fàng)核酸酶。

2.3 植物(wù)組織組織采集

①選取新鮮、幼嫩、生(shēng)長旺盛的組織部位，植物(wù)組織越幼嫩越新鮮所含的次生(shēng)代謝産物(wù)越少，随着植物(wù)的逐漸成熟，所含的次生(shēng)代謝産物(wù)産量越來越多，而次生(shēng)代謝産物(wù)會影響RNA的抽提。以草莓的花爲例，這麽個體(tǐ)量的花，4朵即可，其它花朵樣本一(yī)次類推。

②（部分(fēn)樣本可選項）迅速用預冷的RNase-Free水配制的1×PBS或生(shēng)理鹽水清洗組織表面的污漬，吸幹表面的液體(tǐ)。用剪刀剪切成合适的大(dà)小(xiǎo)（若非特殊情況，長度最好不要超過2cm）

③處理好的組織迅速放(fàng)入預冷好的已寫好編号的RNase-Free的 耐-192℃低溫的螺紋凍存管中(zhōng)，或用标記好名稱的錫箔紙(zhǐ)包裹好， 液氮速凍>1小(xiǎo)時，轉移到-80℃長期保存,在RNA提取前避免反複凍融，幹冰寄送樣本。若在離(lí)體(tǐ)後10min未用液氮速凍降溫，極有可能引起樣本降解。不可直接将樣本放(fàng)入-80℃保存，此時低活性的RNase仍能引起樣本降解

注意事項：

a. 植物(wù)組織不建議RNAlater保存，因爲植物(wù)組織含有細胞壁及次生(shēng)壁，RNAlater不易滲透入組織内部；特别是表面有蠟質的植物(wù)種植，勿用TriZol直接浸泡植物(wù)組織

b. 不允許将植物(wù)組織磨成粉寄送。

c. 表面含有較多蠟質的植物(wù)樣本或次生(shēng)代謝産物(wù)含量極高的植物(wù)組織或植物(wù)組織的莖和根及種子RNA得率通常會較低，爲提高RNA的得率需要加大(dà)送樣量，爲普通樣本送樣量的3-4倍。

2.4 全血/PBMC/血清/血漿以及其他體(tǐ)液樣本搜集

聯川生(shēng)物(wù)推薦使用BD公司的PAXgene™采血管采集全血，使用BD公司的真空采血管采集全血後分(fēn)離(lí)血清，或使用EDTA紫色抗凝管搜集全血樣本以及分(fēn)離(lí)後續的血漿樣本。不允許使用綠色的肝素采血管采集全血，因爲肝素會影響PCR酶的逆轉錄效率。

a. PAXgene采血管采集全血方式：

①采血前，應将采血管恢複室溫，推薦溫度爲18-25℃（一(yī)般PAXgene采血管保存于室溫或4℃，最高不超過40℃）

②采血時，假如前面已經使用了多種采血管采集血液時，應該在最後使用PAXgene采血管；僅用PAXgene采血管時，先用另一(yī)個采血管采集1-2mL血樣，丢棄該采血管，再使用PAXgene采血管。這種作用是因爲，采血器容積能被預灌注，另減少血壓造成的沖擊力，一(yī)定程度上清洗采血管，采血量：2.5ml，适用對象：人和靈長類動物(wù)。

③采血後，立即上下(xià)颠倒混勻十次左右，18-25℃正立放(fàng)置2h。④ 若不立即提取，将采血管正立置于塑料試管架上（注意：試管架與采血管之間需留有空隙，防止低溫保存過程中(zhōng)管壁開(kāi)裂），先于-20℃放(fàng)置24h,然後轉移至-80℃進行長期保存或轉移至幹冰中(zhōng)進行運輸。注意，在這一(yī)步中(zhōng)需要把采血管中(zhōng)的全血樣本轉到螺紋口凍存管即可放(fàng)入-80℃冰箱，無需再将凍存管在 液氮速凍1小(xiǎo)時。

⑤運輸時請使用厚壁泡沫盒，放(fàng)入充足的幹冰，在樣品保存及運輸過程中(zhōng)應避免反複凍融。

b. EDTA采血管/真空采血管采集全血方式：

①樣本采集前，先用75%的酒精棉由内向四周對采血部位進行消毒

②采血至特定的采血管中(zhōng)，數量達到負壓允許的最大(dà)值

③樣本采集完成後，立即輕柔颠倒混勻10次。動作盡可能平緩。加入三倍以上體(tǐ)積的TriZol（TriZol:血液≥3:1）裂解液混勻，此時出現沉澱爲正常情況。

④混勻完畢後，立刻轉入 耐-192℃低溫的螺紋口凍存管，轉入-80℃冰箱保存，幹冰運輸。注意采血至提取RNA最長時間不得超過一(yī)周。

c. 血漿中(zhōng)PBMC提取法：

①接着上一(yī)步EDTA抗凝管離(lí)心後分(fēn)層那一(yī)步，将Ficoll和PBS從低溫恢複到室溫

②向50mL離(lí)心管（标記A）中(zhōng)加入10mL Ficoll，随後最好靜置一(yī)段時間；向另一(yī)隻50mL離(lí)心管（标記B）加入10mL PBS

③稀釋：溫和搖勻抗凝采血管，用 kimwipes或者消毒紗布移除上蓋并放(fàng)一(yī)邊，将 10mL血液轉移至B離(lí)心管，溫和混合，獲得PBS混合液（20mL）

④适度傾斜離(lí)心管A，将20mL PBS 混合液沿壁緩慢(màn)加入（注意要緩慢(màn)，過快會穿破Ficoll層，極大(dà)影響提取效果）

⑤梯度離(lí)心：小(xiǎo)心地将離(lí)心管放(fàng)入離(lí)心機（不要擾動液體(tǐ)層），室溫400g 20min離(lí)心，加速/減速分(fēn)别設置爲1/0

⑥離(lí)心之後小(xiǎo)心将其取出，放(fàng)置于操作台上，可見分(fēn)爲四層，見上圖

⑦可選：先移除淋巴細胞層上2-3mm的血漿，方便後面吸取

⑧用P1000移液槍盡可能吸取PBMC，轉移至15mL離(lí)心管，盡量避免吸取血漿和Ficoll

⑨加入PBS 使體(tǐ)積變爲10mL，蓋上蓋并溫和翻轉搖勻5次

⑩室溫 300g 10min離(lí)心，加速/減速分(fēn)别設置爲9/9。去(qù)上清并輕彈離(lí)心管末端，直至細胞團在剩餘PBS中(zhōng)完全重懸

注意事項：重複步驟⑨-⑩，最後按照TriZol和體(tǐ)積約3:1的比例加入TriZol保證充分(fēn)裂解，裂解标準請參考上面貼壁細胞裂解液處理方式

d. 血清樣本（外(wài)泌體(tǐ)适用）

①建議使用進口醫用血清管或真空采血管等收集全血

②上下(xià)輕輕颠倒混勻十次後，立即将全血置于4°C或冰盒中(zhōng)正立放(fàng)置

③1800g 10min離(lí)心分(fēn)離(lí)得到上層血清樣本（全血需在1h内進行血清分(fēn)離(lí)，依據血清管操作說明或客戶實驗室血清分(fēn)離(lí)步驟進行操作）

④将血清轉移至1.5mL離(lí)心管中(zhōng)，13000g離(lí)心2min；

⑤将上清轉移至規格在200μL-1.5mL耐-192℃超低溫螺紋口凍存管中(zhōng)，每份樣本至少≥100μL（0.1mL）。 液氮速凍1h後-80℃保存，幹冰運輸

e. 血漿樣本（外(wài)泌體(tǐ)适用）

①建議使用紫色EDTA抗凝管收集全血樣本

②上下(xià)輕輕颠倒混勻十次後，立即将全血置于4°C或冰盒中(zhōng)正立放(fàng)置

③1200g 10min離(lí)心分(fēn)離(lí)得到上層血漿樣本（全血需在1h内進行血漿分(fēn)離(lí)，依據抗凝管操作說明或客戶實驗室血漿分(fēn)離(lí)步驟進行操作）

④将血漿轉移至1.5mL離(lí)心管中(zhōng)，13000 g離(lí)心2min

⑤将上清轉移至規格在200μL-1.5mL耐-192℃超低溫螺紋口凍存管中(zhōng)，每份樣本至少≥100μL（0.1mL）。 液氮速凍1h後-80℃保存，幹冰運輸

注意事項：

a.分(fēn)離(lí)血清血漿應嚴格按照操作說明進行，操作需在1h内完成，避免出現溶血現象，血清血漿分(fēn)離(lí)後避免反複凍融。

b. 血清血漿送樣量的原則：越多越好，如果客戶手頭上的血清血漿量較少，則有多少就送多少，通常該種類型的樣本RNA含量較低，所以需要通過加大(dà)樣本量以富集足夠多的RNA，以保證後續實驗的順利進行，此外(wài)血清血漿RNA通常不質檢

c.分(fēn)離(lí)血清/血漿樣本的全血不可冷凍，混入的血細胞的樣本盡量棄盡，已無法使用

d血清/血漿的RNA得率爲2-8ng/mL

小(xiǎo)貼士——

溶血現象解釋：即因紅細胞細胞膜的破裂而導緻的紅細胞破碎、血紅蛋白(bái)溢出的現象。溶血可由多種物(wù)理或化學因素引起，尤其在人體(tǐ)外(wài)，滲透壓的變化、機械外(wài)力，溫度的變化，酸堿度的變化或血液處理的過程中(zhōng)人爲添加的一(yī)些化學物(wù)質，均有可能引起不同程度的溶血

溶血應對策略：(1)血液離(lí)開(kāi)人體(tǐ)後，血液環境的穩定性與保存時間的長短呈反比，細胞膜的穩定性也在下(xià)降，在這種情況下(xià)，應盡快開(kāi)展血清血漿的分(fēn)離(lí)；(2)不同的抗凝劑有其不同的分(fēn)子構型，會對血液中(zhōng)各細胞的細胞膜産生(shēng)不同的作用，有的會增加細胞膜的穩定性，有的會降低細胞膜的穩定性，所以選擇一(yī)款合适的抗凝劑至關重要（抗凝劑推薦：EDTA、檸檬酸鈉）；(3)血液存放(fàng)過程中(zhōng)溫度過高或反複凍融對細胞膜有很大(dà)的損害。溫度過高及反複凍融會使細胞膜上的結構蛋白(bái)構象發生(shēng)改變，進而造成細胞膜的彈性降低以緻破解産生(shēng)溶血現象，所以用于分(fēn)離(lí)血清血漿的血液應避免反複凍融

f. 細胞上清液、尿液、唾液、羊水、腦脊液（外(wài)泌體(tǐ)相似）

①收集細胞上清液、新鮮尿液、唾液、羊水、腦脊液（起始量按照前面表格中(zhōng)提示），要确保不能溶血（血液中(zhōng)蛋白(bái)會污染樣品蛋白(bái)）；置于4°C 或冰盒中(zhōng)正立放(fàng)置，轉移至RNase-free離(lí)心管。以下(xià)操作請在樣本收集後的1h内進行，以防RNA降解

②在4°C條件下(xià)離(lí)心3000g約10 min，去(qù)除細胞及碎片

③将上清小(xiǎo)心傾倒入新的RNase-free離(lí)心管（注意不要轉移沉澱），在4°C條件下(xià)離(lí)心13000g約2 min，去(qù)除殘留的碎片及細胞

④轉移上清至全新的耐-192℃超低溫螺紋口凍存管中(zhōng)， 液氮速凍1h（可選），嚴密封口。-80°C保存，幹冰運輸

注意事項：細胞上清液碎片過多，需要充分(fēn)低速離(lí)心多次去(qù)除碎片。收集尿液的前一(yī)天飲食要清淡，晨起中(zhōng)段尿（臨床），晨間1h的尿液（動物(wù)）。唾液搜集之前需要禁食禁煙禁酒2h以上，上午9:30-11:30取樣，蒸餾水漱口，将唾液吐于無菌的痰杯（保持水浴），不要咳痰，采集唾液時間爲30min左右，4℃ 10000rpm 10min，取上清，經0.22μm濾膜過濾除菌。

2.5 石蠟組織

手術/活檢組織石蠟塊

RNA單次提取需35mg以上的量。從醫院病理科切取手術組織總量≥35mg（綠豆大(dà)小(xiǎo)，不可取暴露于空氣中(zhōng)的組織截面部分(fēn)），活檢組織長度>1cm，需2-3條，蠟塊完整，無磕碰損傷的石蠟包埋組織。未切片的石蠟塊4℃或常溫運輸即可

手術/活檢組織石蠟卷片/活檢組織石蠟切片

RNA提取一(yī)次提取<80μm。從醫院病理科切取組織厚度約爲10-20μm的石蠟卷片，手術組織10張（組織>1×1cm2），或20張（組織<1×1cm2），穿刺組織20-25張。将切好的卷片放(fàng)置于耐-192℃超低溫螺紋口凍存管，迅速浸入液氮速凍>1h, -80℃保存或者幹冰運輸。

注意事項：

a. 送樣優先順序： 石蠟塊＞石蠟卷＞石蠟切片

b. 所有石蠟組織樣本需盡量送檢一(yī)年以内的樣本， 不得超過18個月，建議提供一(yī)張免疫組化或組化染色切片

c. 新制切片常溫放(fàng)置應在1周以内，2-8℃放(fàng)置應在1個月以内，-20℃貯存應在6個月以内

d. 強烈建議每個貼片盒中(zhōng)隻存放(fàng)一(yī)個患者的樣本；若需與其他患者樣本放(fàng)在一(yī)起，必須做間隔區分(fēn)，防止樣本接觸造成污染

e. 強烈不建議使用添加瓦楞紙(zhǐ)或自折Z形紙(zhǐ)擺放(fàng)石蠟切片，因運輸過程中(zhōng)的碰撞會導緻石蠟切片擠到一(yī)起，造成切片破損或樣本污染。

石蠟組織容器

石蠟切片示例

2.6 非緻病性細菌樣本采集

一(yī)次反應所需細菌的量≤1×107個

①顯微鏡下(xià)觀察生(shēng)長狀态，收集對數生(shēng)長期細菌；

②将适量體(tǐ)積的菌液轉移至2mL旋蓋尖底RNase-Free離(lí)心管中(zhōng)，室溫或4℃下(xià)14000g離(lí)心4-10min

③棄盡培養基，将細菌沉澱迅速置于 液氮速凍>1h，然後轉移至-80℃或液氮中(zhōng)長期保存，幹冰運輸

2.7 非緻病性真菌樣本采集

一(yī)次反應所需真菌的量≤50mg，将真菌稱重，分(fēn)裝多管；将稱重後的真菌置于預冷的耐-192℃超低溫螺紋凍存管中(zhōng)，迅速投入液氮，速凍時間>1h，轉入-80°C長期保存或用幹冰直接寄出。

2.8 緻病性真菌細菌處理方法

所有可能緻病的真菌、細菌RNA項目樣品，均需要按下(xià)面步驟預處理以後才能寄送至公司，且需要提前通知(zhī)實驗室，明确菌種。溶液A，B可以向實驗室索要。實驗室将對未經處理的可能緻病的樣品，進行銷毀處理

①細菌/真菌沉澱（不超過30mg，約綠豆大(dà)小(xiǎo)）加入400ul溶液A，吹打重懸菌體(tǐ)。

②在重懸的菌體(tǐ)中(zhōng)加入400ul溶液B，劇烈震蕩混勻。

③65℃水浴或金屬浴加熱30min，每隔5min劇烈震蕩一(yī)次，防止分(fēn)層。

④處理結束以後，-80℃凍存，幹冰運輸。如爲緻病菌，請用70%乙醇處理容器表面（注意如處理過程中(zhōng)編号模糊，處理後重新寫好編号），确保安全。

注意事項：

（1）室溫較低時溶液A可能析出沉澱，可65℃預熱2-3min待沉澱溶解後混勻使用。

（2） 溶液B有腐蝕性，使用注意安全操作。溶液B爲有機溶液，上層液體(tǐ)爲水封，吸取時确保将槍頭插入下(xià)層液體(tǐ)。

（3） 溶液A，B不互溶，操作時需要震蕩充分(fēn)，使兩種液體(tǐ)形成乳濁液。

（4） 樣品提交單上請注明：樣品經過溶液A，溶液B預處理。

2.9 Total RNA樣品

Total RNA一(yī)般長期保存于-80℃冰箱，若要寄送可直接使用幹冰寄出，或加入适量保存液，再用幹冰運輸。

RNA的保存介質（建議濃度>50ng/μL）：

①RNA保存液（1/10體(tǐ)積3M NaAc，pH=5.2，3倍體(tǐ)積無水乙醇）

②3倍體(tǐ)積無水乙醇

③RNase-free水（送樣量>15μL）

注意事項：

(1) total RNA中(zhōng)應盡量避免多糖、蛋白(bái)、DNA等雜(zá)質的殘留，送樣時需注明溶劑成分(fēn)

(2) total RNA應避免反複凍融，由于反複凍融所産生(shēng)的剪切力會對RNA樣品有破壞作用，所以在實際操作中(zhōng)，應對RNA樣品小(xiǎo)量分(fēn)裝

輔助材料

1. 樣本包裝注意事項

①在包裹樣本的鋁箔或冷凍保存管表面，用油性記号筆标明樣本編号及樣本類型。并且不要與乙醇等有機溶劑接觸

②不要用紗布、紙(zhǐ)張直接包裹樣本，而是用鋁箔或冷凍保存管包裹後再裝入樣本袋中(zhōng)

③不要用玻璃容器在液氮中(zhōng)保存樣本；

④不要把标簽紙(zhǐ)或其他紙(zhǐ)制的說明性文件放(fàng)入樣本袋内，因爲紙(zhǐ)張在液氮中(zhōng)是易碎的

⑤标簽紙(zhǐ)應該貼于樣本袋繩上，不要貼于容器表面以免脫落造成樣本混亂

⑥ 不要在一(yī)隻樣本袋中(zhōng)放(fàng)過多的樣本，以防無法放(fàng)入液氮罐或無法從液氮罐中(zhōng)取出。樣本袋在使用前先在液氮中(zhōng)預冷

⑦ 客戶在填寫《樣本登記單》時應當詳細描述（臨床樣本則最好也注明臨床病因及所處階段）樣本的類型、處理方法、儲存條件以及儲存時間等相關細節，以便技術人員(yuán)确定合理的實驗方案

3

樣本儲存注意事項

① 液氮速凍完畢後，攜帶樣本的凍存管或錫箔紙(zhǐ)等應該立即放(fàng)入-80℃保存。常規樣本在10min内必須立刻使用液氮速凍，不可直接将樣本在未經液氮速凍處理後直接放(fàng)入-80℃保存。未經液氮淬滅的樣本中(zhōng)還會殘留低活性的酶，從而引起核酸降解以及蛋白(bái)變性

② 組織樣本采集後，樣本迅速放(fàng)入進口高質量凍存管中(zhōng)，凍存管推薦使用進口的并且耐低溫-192℃的螺紋口凍存管，擰緊後立即放(fàng)入液氮。然後再轉移到-80℃中(zhōng)保存。如果因爲沒有擰緊會導緻液氮流入凍存管，空氣熱脹冷縮後發生(shēng)爆炸

③ 組織樣本儲存于液氮或-80℃冰箱中(zhōng)。對于液氮保存樣本，務必注意，不要用非螺口離(lí)心管和國産凍存管，因爲這些管子從液氮中(zhōng)取出時極易發生(shēng)管子爆裂而造成樣本損失。建議使用第②條提到的凍存管。實在條件缺乏必須使用封口膜将離(lí)心管充分(fēn)封鎖防止爆炸（不推薦這樣操作）

4

樣本運輸注意事項

① 飛機運輸幹冰上限約爲20公斤，超過20公斤原則上不能運輸。火(huǒ)車(chē)運輸不受限制。

② 幹冰運輸應采用壁厚且質量完好的泡沫箱，材料用編号後的凍存管存放(fàng)，用塑料袋包裝後埋入幹冰中(zhōng)，泡沫箱應扣嚴并用封箱帶封嚴。外(wài)套紙(zhǐ)殼箱包裝，以免碰裂。并标明輕取輕放(fàng)提示，以保證安全運輸

③ 幹冰運輸可委托當地快遞公司，盡量确保48小(xiǎo)時内送達公司，不能送貨上門的應提前通知(zhī)公司相應人員(yuán)。

④ 24小(xiǎo)時到達的，幹冰總量不得低于5公斤；48小(xiǎo)時到達的，幹冰總量不得低于8公斤。夏季可以适當再多增加部分(fēn)幹冰（平時的1.5倍）。不要使用大(dà)塊狀幹冰或完全呈粉末狀的幹冰，而是需要小(xiǎo)的圓柱體(tǐ)幹冰，否則運輸過程中(zhōng)自重比較大(dà)的塊狀幹冰可能會在箱内擠壓樣品盒，移動中(zhōng)可能造成樣品盒破裂。如果隻有大(dà)塊狀幹冰可以使用，那麽裝箱時先砸碎成小(xiǎo)塊

⑤ 包裝時建議用大(dà)塑料袋包裹幹冰并在箱中(zhōng)放(fàng)冰袋，可有效減緩幹冰揮發速度。選擇合适大(dà)小(xiǎo)，且箱壁較厚的泡沫箱，并在泡沫箱外(wài)縱橫方向都纏上透明膠，最好是将泡沫箱外(wài)壁用膠帶覆蓋一(yī)遍，帶防止運輸途中(zhōng)因擠壓和抛擲而破裂。泡沫箱全部纏上膠帶後，爲防止密封過緊，氣密性過強，幹冰揮發産生(shēng)過大(dà)壓力而造成泡沫箱爆裂，用美工(gōng)刀或其他薄刃刀具，将纏在泡沫盒蓋和箱體(tǐ)接合處的膠帶刺破一(yī)個1-2厘米的小(xiǎo)縫隙，以在氣壓過高時排出氣體(tǐ)

⑥ 如委托快遞運輸，運輸過程中(zhōng)應随時跟蹤貨物(wù)的情況，記錄貨單号，并保持與發出地和接收地的快遞公司的聯系

5

注意事項

① 客戶如果提供凍存可複蘇的細胞株，應首先驗證所用凍存方法用于RNA提取的可靠性，并且在送樣時提供詳盡的複蘇方法，以便确保實驗成功

② 所有樣本均應标明準确的樣本編号，同時配有一(yī)張樣本登記表，寫明樣本名稱、物(wù)種、編号、取樣日期、樣本處理情況等。

③ 提取RNA質與量：a. 處于不同發育階段以及不同生(shēng)長條件的樣本中(zhōng)所含有的RNA、RNA以及蛋白(bái)的量是不同的，在某些實驗條件下(xià)或某些病變部位獲得的樣本中(zhōng)核酸的量可能與常規相應樣本有顯著的差異；b. 儲存條件以及儲存時間也是影響RNA質與量的關鍵因素。一(yī)般來說從新鮮的樣本中(zhōng)總是能夠得到預期的核酸量，并且含量相對較高，更容易檢測。但是沒有保存在液氮或-80℃冰箱中(zhōng)的樣本是不可靠的，因此，強烈建議盡可能低溫保存。

④ 關于備份，爲确保實驗的順利，我(wǒ)們強烈建議您在取樣時，應同時備份2-3份，如備份3份，則送給我(wǒ)們兩份，如果備份 2份，則送樣一(yī)份，您自己留一(yī)份，以防備部分(fēn)樣本降解，重新取材或送樣耽誤您的時間。即使樣本全部合格，備份的樣本您還可以用來進行其他方面的實驗（如定量驗證，蛋白(bái)方面，生(shēng)化方面的實驗等）。備份又(yòu)分(fēn)爲兩種，一(yī)種爲嚴格備份，即樣本取下(xià)後一(yī)分(fēn)爲二，這樣的兩份樣本基本上具備同性質。另一(yī)種爲非嚴格備份，即生(shēng)物(wù)學重複的樣本，這樣的備份樣本同質性要較前者差。

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樣本寄送指南(nán)

① 将收集好的樣本置于相應的收集管中(zhōng)，爲防止樣本混淆管蓋和管壁均要書(shū)寫編号，并用封口膜封口；

② 将樣本放(fàng)入自封袋中(zhōng)，在樣本提交單上填好樣本詳細信息（編号等信息必須嚴格與樣本管上一(yī)緻），将填好的樣本單和樣本一(yī)起放(fàng)入泡沫箱中(zhōng)；

③ 選用大(dà)小(xiǎo)合适、箱壁大(dà)于4 cm且密封性良好的泡沫箱，并在泡沫箱外(wài)縱橫方向都纏上透明膠，防止泡沫箱在運輸過程中(zhōng)的開(kāi)裂。

④ 樣本寄送步驟：