實驗動物(wù)采血
在實驗研究中(zhōng),經常會采集實驗動物(wù)血液用于分(fēn)析和評估動物(wù)體(tǐ)内的生(shēng)理和病理情況。根據不同的實驗設計和要求及動物(wù)的特性和生(shēng)理差異,選擇合适的采血方法,可以減少動物(wù)傷害,提高實驗的成功率和結果的可靠性。今天小(xiǎo)編給大(dà)家普及下(xià)實驗動物(wù)采血方法及采血管的選擇。
01 大(dà)鼠、小(xiǎo)鼠采血方法
采血方法:動物(wù)麻醉後并固定,将鼠尾在45-50℃溫水中(zhōng)浸泡數分(fēn)鍾,也可用二甲苯等化學藥物(wù)塗擦,使局新血管擴張。擦幹尾部,用酒精棉球消毒鼠尾,用無菌手術刀,快速截斷小(xiǎo)鼠尾尖約1-2mm,可以從尾部向尾尖方向按摩,以增加血流。用毛細采血管收集血液,或直接滴入收集管中(zhōng)。采血結束後,用幹棉球按壓傷口或使用止血劑來止血。
應用:所需血量少的連續多次采次,此法每隻鼠可采血10餘次。常用于紅、白(bái)細胞計數、血紅蛋白(bái)測定、制作血塗片等。
采血量:小(xiǎo)鼠可每次采血約0.1ml,大(dà)鼠約0.4ml。
優點:操作較簡單,動物(wù)不緻死,可多次重複采血。
缺點:取血量少,約0.1ml,采血速度慢(màn),不适于樣本量大(dà)和需要較多血量的實驗;不适用于老齡鼠;按摩鼠尾時可能會增加溶血風險,易污染。
頸靜脈采血
采血方法:左手固定大(dà)鼠,使大(dà)鼠呈現腹部朝上的一(yī)個“十”字形,讓大(dà)鼠頸部依靠在保定器上,頸部與前肢呈大(dà)于90°角,用頭部固定器扭動頸部,使鎖骨出現一(yī)個三角窩,去(qù)除鎖骨附近被毛,酒精棉球擦拭消毒。右手持注射器,沿鎖骨處進針(去(qù)除毛發後可清晰可見靜脈處),刺穿皮膚後輕回拉注射器,使注射器産生(shēng)負壓。大(dà)約30度向上進針,當注射器内有血液出現時說明已經刺入采血位置,保持注射器,回拉注射器完成采血。采血完成後用幹棉球稍按壓止血即可。
應用:适用于人手少、動物(wù)數量多、實驗時間緊以及藥代動力學等需連續少量取血的研究中(zhōng)。
優點:相對于眼眶後靜脈叢采血法對動物(wù)造成的疼痛感更小(xiǎo),更加符合動物(wù)福利,所以現在大(dà)有取代眼眶後靜脈叢采血的趨勢。本法适用于大(dà)鼠。
缺點:要求技術熟練,在一(yī)定時間内,如果采血量和采血次數增加,會使動物(wù)引起一(yī)定的應激性反應或采血部位的傷害。
眼眶靜脈叢采血
采血方法:動物(wù)麻醉後并放(fàng)置動物(wù)台上,用左手拇指和食指壓迫小(xiǎo)鼠頸部兩側同時将皮膚向後拉(注意避免用力過度壓迫氣管),使眼球外(wài)突,提示眼眶後靜脈叢充血。右手拿一(yī)毛細管(建議采用0.5*100mm規格的毛細管,在使用前折成小(xiǎo)段,每段大(dà)約3-4cm),置于内側眼角處,并且以與鼻翼平面成30-45度沿内眦插入内眼角,滑入眼球後方,輕輕向眼底方向刺入。不能刺地過深,一(yī)般小(xiǎo)鼠2-3mm,大(dà)鼠4-5mm即可。當感到阻力時即停止推進,轉180°使斜面對着眼眶後界,即有血液流出。采血結束後,立即松開(kāi)手指對小(xiǎo)鼠的壓迫,使眼球複位,同時拔出毛細管。可用幹棉球壓住眼眶,确保止血。
應用:适用于需中(zhōng)等量血液、避免小(xiǎo)鼠死亡的血液指标連續監測。
優點:眼眶後靜脈叢采血法簡單,便于掌握,采血成功率高,小(xiǎo)鼠死亡率低,血流較快。
采血量:小(xiǎo)鼠可采血約0.2-0.3ml,大(dà)鼠約0.4-0.6ml。
缺點:采血後需要至少10天的組織修複過程,否則采血量産生(shēng)一(yī)定影響;不能采集到無菌的血樣,血液中(zhōng)可能混有眼窩内的組織液和腺體(tǐ)分(fēn)泌物(wù),對于血樣要求較高的研究,應謹慎使用;易損傷眼球,易感染,造成失明。
腹主動脈采血法
采血方法:大(dà)鼠麻醉後仰卧固定在實驗台上,将大(dà)鼠腹腔注射10%水合氯醛以0.03ml/kg麻醉5min即可。大(dà)鼠背部放(fàng)置一(yī)粗試管以充分(fēn)暴露腹主動脈,常規消毒後用手術剪刀沿腹正中(zhōng)線剪開(kāi)腹腔。術後右手持穿刺針針尖斜面朝下(xià)入針角度約25°~30°朝向心端放(fàng)向刺入,深度以5mm左右爲宜,抽吸血液即可。
采血量:大(dà)鼠可采血約8~10ml,一(yī)般采3種血樣全過程隻需2min。
優點:該采血法取血量大(dà)、不易溶血,血液質量較好,适用于多項目檢測,且不損傷器官,有利于病理組織學檢查。
缺點:操作比較複雜(zá),應注意掌握适宜的麻醉深度,防止心跳驟停,同時防止大(dà)鼠躁動。本方法造成的出血速度快,易造成出血性的心髒停跳,故要防止采血過程中(zhōng)出血。
02 豚鼠采血方法
先将豚鼠耳消毒,用刀片沿血管方向割破耳緣,切口約長0.5cm,在切口邊緣塗上20%的檸檬酸鈉溶液,防治血凝,則血可自切口處流出。此法采血每次可采0.5ml。
固定豚鼠,将其右或左後肢膝關節伸直,腳背消毒,找出足靜脈,左手拇指和食指拉住豚鼠的趾端,右手将注射針刺入靜脈,拔針後立即出血。
用手指觸摸,選擇心跳最明顯的部位,把注射針刺入心髒,血液即流入針管。心髒采血時所用的針頭應細長些,以免發生(shēng)采血後穿刺孔出血。
03 兔的采血方法
将兔固定,拔去(qù)耳緣靜脈局部的被毛、消毒,用手指輕彈兔耳,使靜脈擴張,用針頭刺耳緣靜脈末端,或用刀片沿血管方向割破一(yī)小(xiǎo)切口,血液即流出。本法爲兔最常用的采血方法,可多次重複使用。
在兔耳中(zhōng)央有一(yī)條較粗的、顔色較鮮紅的中(zhōng)央動脈。用左手固定兔耳,右手持注射器,在中(zhōng)央動脈的末端,沿着與動脈平行的向心方向刺入動脈,即可見血液進入針管。由于兔耳中(zhōng)央動脈容易痙攣,故抽血前必須讓兔耳充分(fēn)充血,采血時動作要迅速。采血所用針頭不要太細,一(yī)般用6号針頭,針刺部位從中(zhōng)央動脈末端開(kāi)始,不要在近耳根部采血。
采血量超過1ml時,頸靜脈是常用的采集部位。方法同大(dà)鼠頸靜脈采血。
使家兔仰卧,穿刺部位在第三肋間胸骨左緣3mm處, 針頭刺入心髒後,持針手可感覺到兔心髒有節律的跳動。此時如還抽不到血,可以前後進退調節針頭的位置,注意切不可使針頭在胸腔内左右擺動,以防弄傷兔的心、肺。
04 狗的采血方法
後肢外(wài)側小(xiǎo)隐靜脈位于後肢胫部下(xià)三分(fēn)之一(yī)的外(wài)側淺表皮下(xià),由前側方向後行走。采血時,将動物(wù)固定,局部剪毛、消毒,采血者左手緊握剪毛區上部或紮緊止血帶,使下(xià)部靜脈充血,右手用連有6号或7号針頭的注射器刺入靜脈,左手放(fàng)松,已适當速度抽血即可。
前肢背側皮下(xià)頭靜脈位于前腳爪的上方背側的正前位。采血方法同上。
前兩種方法需技術熟練,且不适于連續采血。大(dà)量或連續采血時,可采用頸靜脈采血,方法同小(xiǎo)鼠、大(dà)鼠的頸靜脈采血方法。
本法爲采取動脈血最常用的方法。操作簡便,稍加訓練的狗,在清醒狀态下(xià)将狗卧位固定于狗解剖台上。伸展後肢向外(wài)伸直,暴露腹股溝三角動脈搏動的部位,剪毛、消毒,左手中(zhōng)指、食指探模股動脈跳動部位,并固定好血管,右手取連有5号半針頭的注射器,針頭由動脈跳動處直接刺入血管,若刺入動脈一(yī)般可見鮮紅血液流入注射器,有時還需微微轉動一(yī)下(xià)針頭或上下(xià)移動一(yī)下(xià)針頭,方見鮮紅血液流入。有時可能刺入靜脈,必須重抽。抽血畢,迅速拔出針頭,用幹藥棉壓迫止血2-3分(fēn)鍾。
紅色頭蓋:普通血清管,采血管不含有任何添加劑,用于常規血清生(shēng)化,血庫和血清學相關檢驗;
桔紅色頭蓋:快速血清管,采血管内有促凝劑,加速凝血過程。适用于急診血清的化驗系列;
金黃頭蓋:惰性分(fēn)離(lí)膠促凝管,一(yī)般用于急診血清生(shēng)化試驗;
綠色頭蓋:肝素抗凝管,一(yī)般用于紅細胞壓積實驗,紅細胞脆性試驗,血氣分(fēn)析,血沉及普通的生(shēng)化測定;
紫色頭蓋:又(yòu)叫EDTA抗凝管,一(yī)般是用于普通的血液學檢測,但是不适用于凝血實驗及血小(xiǎo)闆功能的檢測,也不能用于鈉、鉀、鈣、鐵、堿性磷酸等的測定;
淺藍(lán)色的頭蓋:枸橼酸鈉,凝血實驗管;
黑色頭蓋:枸橼酸鈉血沉實驗管;
灰色頭蓋:草酸鉀、氟化鈉,氟化鈉管,适用于血糖測定,一(yī)般不用于尿素酶法測定尿素,常用于血糖檢測。
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