技術專欄
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什麽是ELISA--原理與分(fēn)類
一(yī)、基本原理 1971年Engvall和Perlmann發表了酶聯免疫吸附劑測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年開(kāi)始用于抗原定位的酶标抗體(tǐ)技術發展成液體(tǐ)标本中(zhōng)微量物(wù)質的測定方法。 這一(yī)方法的基本原理是：①使抗原或抗體(tǐ)結合到某種固相載體(tǐ)表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體(tǐ)與某種酶連接成酶标抗原或抗體(tǐ)，這種酶标抗原或抗體(tǐ)既保留其免疫活性，又(yòu)保留酶的活性。在測定時，把受檢标本（測定其中(zhōng)的抗體(tǐ)或抗原）和酶标抗原或抗體(tǐ)按不同的步驟與固相載體(tǐ)表面的抗原或抗體(tǐ)起反應。用洗滌的方法使固相載體(tǐ)上形成的抗原抗
2022-05-23
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内參抗體(tǐ)怎麽選
内參抗體(tǐ)可用于評價蛋白(bái)質免疫印迹法(Western Blot)的效率，比較凝膠中(zhōng)每孔的蛋白(bái)上樣量。此類對照可幫助确定樣品間表達水平的差異，以判斷是由細胞裂解物(wù)的實際蛋白(bái)水平導緻，還是由上樣量的差異導緻。 内參抗體(tǐ)主要功能 （1）檢測整個WB流程是否正常 （2）檢測基因表達産物(wù)是否正确 （3）比較産物(wù)微量的相對變化 （4）評價各個上樣孔内蛋白(bái)的總量是否基本一(yī)緻 圖一(yī)示例 内參抗體(tǐ)在目标蛋白(bái)的免疫熒光研究中(zhōng)，也可以作爲共染的陽性對照。内參抗體(tǐ)分(fēn)爲未标記型和标記型，标記物(wù)包括生(shēng)物(wù)素、HRP、FITC、PE、Cy染料和Alexa Fluor染料。
2022-05-11
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ELK Biotechnology歸納Elisa實驗中(zhōng)樣本的制備與保存
樣品收集注意事項 1. 樣品收集後若在1周内進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一(yī)次使用量分(fēn)裝 （ELK Biotechnology單指标夾心法試劑盒，單孔标準上樣量爲100μl ），凍存于-20℃(1個月内檢測)，或-80℃(3個月内檢測)，避免反複凍融。融化樣本在試驗前請再次離(lí)心以去(qù)除凍融後可能出現的沉澱物(wù)。 2. 試劑盒檢測範圍不等同于樣本的濃度範圍，如果您的樣品中(zhōng)檢測物(wù)濃度高于标準品最高值，請根據實際情況，做适當倍數稀釋(建議查閱文獻後先做預實驗，以确定稀釋倍數)。 3. 若所檢樣本不在說明書(shū)所列樣本之中(zhōng)，建議做預實驗驗證其檢測有效性。
2022-05-04
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通過兩種軟件計算ELISA結果
方法一(yī)：使用Curve Expert1.4軟件（點擊下(xià)載Curve Expert1.4） 标準曲線的繪制 可以采用各種繪圖軟件來繪制ELISA标準曲線，下(xià)面以“Curve Expert1.4”軟件爲例，繪制ELISA标準曲線的方法如下(xià)； 1．啓動“Curve Expert” 2．X軸輸入标準品的OD值（雙抗夾心輸入OD-空白(bái)值），Y軸輸入所對應的濃度值，如圖： 3．單擊[運行] 按鈕，出現如下(xià)對話(huà)框 4．單擊[ok
2022-05-04
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ELISA實驗操作視頻(pín)
2022-04-26
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Westernblot實驗蛋白(bái)提取
貼壁細胞總蛋白(bái)提取： 用TBS緩沖液潤洗貼壁細胞2-3次，最後一(yī)次盡量吸幹殘留液。加入适當體(tǐ)積的細胞總蛋白(bái)提取試劑(使用前數分(fēn)鍾内加入蛋白(bái)酶抑制劑)于培養闆/瓶内裂解3-5min。期間反複晃動培養闆/瓶，使試劑與細胞充分(fēn)接觸。用細胞刮刀将細胞及試劑刮下(xià)，收集到1.5mL離(lí)心管中(zhōng)。冰浴30min，期間用移液器反複吹打，确保細胞完全裂解。4℃13000g離(lí)心5min，收集上清，即爲總蛋白(bái)溶液。 懸浮細胞總蛋白(bái)提取： 低速離(lí)心收集細胞，加入适當體(tǐ)積的冷卻的PBS緩沖液重懸，2000rpm離(lí)心10min，吸除上清。重複以上操作兩次，收集細胞沉澱。加入适當體(tǐ)積的細胞總蛋白(bái)提取試劑(使用
2021-08-14
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引物(wù)幹粉使用說明
(1)引物(wù)幹粉開(kāi)蓋前13000rpm，室溫離(lí)心1min。 (2)加入管壁上10倍nmole數值的水(μL)的DEPC水，渦旋混勻，瞬時離(lí)心。此爲引物(wù)儲備液(100μM)，用後于-20℃保存。 *引物(wù)管上一(yī)般是3.0~6.0nmole，加入十倍這個數值微升的水(30~60μL)。 (3)取一(yī)新1.5mL EP管，加入380μLDEPC水，上下(xià)遊引物(wù)儲備液各吸取10μL于新EP管中(zhōng)，渦旋混勻，瞬時離(lí)心。此爲引物(wù)工(gōng)作液(2.5μM)，可直接用于實驗，用後于4℃保存。
2021-08-14
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